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대한생식의학회지 제23권 제3호 2010년

착상전 소 초기배의 성판정을 위한 PCR과 PRINS의 적용

고려대학교 응용동물과학과;고려대학교 응용동물과학과;고려대학교 응용동물과학과;고려대학교 유전공학과;고려대학교 응용동물과학과;

서승운;이홍준;김기동;박성수;이상호;,

Applications of PCR and PRINS for the Sexing in Bovine Preimplantation Embryos

Seo, Seung-Woon;Lee, Hong-Jun;Kim, Ki-Dong;Park, Sung-Soo;Lee, Sang-Ho;

Departments of Amimal Science, Korea Univ.;Departments of Amimal Science, Korea Univ.;Departments of Amimal Science, Korea Univ.;Departments of Genetic Engineering, Korea Univ.;Departments of Amimal Science, Korea Univ.;

초기배의 성판정은 대상가축의 성을 선발하는 수단으로써 뿐만아니라 인간의 유전적 질병의 조기진단법으로서 매우 가치가 크다. 체외수정 소 초기배의 성을 결정하기 위해 PCR과 PRINS를 이용하였으며 성판정에 이용된 8 세포${\sim)$배반포기 초기배는 체외수정후 난관상피세포와의 공배양에 의해 생산되었다. 초기배 의 DNA는 $200{\mu}g/ml$ proteinase K가 함유된 PCR lysis buffer에 하나의 초기배를 부유한 후 $50^{\circ}C$에서 1시간동안 처리하여 준비하였다. 중기 염색체 spreads는 초기배를 nocodazole로 처리한 후 air-drying 방법을 이용하여 준비하였다. 가능한 false positive signals을 배제하기 위해 소특이 및 Y 염색체 특이 primers를 이용하여 PCR을 수행한 결과, 웅성 초기배에서는 두 개의 증폭산물 (소특이 및 Y 염색체 특이)이 합성된 반면 자성 초기배에서는 하나의 증폭산물만 합성되었다. 한편 중기염색체상의 Y 염색체를 동정하기 위해 FISH와 PRINS를 수행한 결과, FISH에서보다 PRINS에서 더 강한 Y 염색체 특이 형광 signals이 탐지되었다. 이러한 결과는 PCR에 의한 체외생산 소 초기배의 신속정확하고 효율적인 성판정이 가능함을 보여주었다. 또한 PRINS를 통해 PCR 에 이용된 Y 특이 probe의 신뢰성이 염색체 수준에서 확인되었다.

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