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대한생식의학회지 제25권 제1호 2010년
Electron Microscopic Grid를 이용한 초급속동결이 소 난포란의 발달능에 미치는 영향
마리아 기초의학연구소, 1 건국대학교 축산대학, 2 마리아 산부인과
김은영, 김남형1, 이봉경, 윤산현2, 박세필, 정길생1, 임진호2,
Developmental Capacity of Bovine Follicular Oocytes after Ultra-Rapid Freezing by Electron Microscope Grid
Kim ey, Kim nh, Yi bk, Yoon sh, Park sp, Chung ks, Lim jh
본 연구는 소 미성숙난자를 electron microscope grid와 동해제인 EFS30을 이용하여 초급속 동결하였을 때 정상적인 배 발달의 유도가능성 여부를 조사하고자 실시하였다. 동해제는 30% ethylene glycol, 18% ficoll, 0.5 M sucrose와 10% FBS등이 PBS에 첨가되어 제작된 EFS30을 사용하였다. 난자생존의 평가기준으로는 성숙, 수정 및 배발달을 조사하였다. 본 연구에서 얻어진 결과는 다음과 같다. 초급속동결-융해 후, 소 미성숙란의 생존율은 43.2%을 나타내었다. 동결-융해군의 체외성숙 (84.1%) 과 정상 자웅전핵 형성율 (57.5%) 은 대조군의 결과 (92.5, 65.0%) 와 비교하여볼 때 유의한 차이는 없었다. 또한, 동결군의 체외수정 이후의 ≥2-세포기 형성 (65.0%) 과 배반포형성율 (30.8%) 도 대조군 (73.7, 35.7%) 의 결과와 유의한 차이를 나타내지 않았다. 따라서 소 미성숙난자는 EM grid와 EFS30 동결액을 이용한 초급속 동결방법에 의해 정상적인 배발달이 유도될 수 있다는 것을 알 수 있었다.
Cryopreservation of bovine oocytes at germinal vesicle (GV) stage or metaphase II stage was impeded by poor survival rates according to more increased chilling sensitivity than later stage such as morula or blastocyst (Fahning and Garcia, 1992). Also, it has known that developmental capacity of frozen immature bovine oocytes was lower than that of frozen mature oocytes (Fuku et al., 1992). In major reason of that, tolerance of immature oocytes to the cryoprotectant is very poor than that of mature oocytes (Fuku et al., 1995). So far, the study on cryopreservation of bovine oocytes was more concentrated at slow freezing using a programmable freezer than rapid-freezing or vitrification. Recently, a new ultra-rapid freezing method using eletron microscope (EM) grids was introduced into bovine oocyte cryopreservation, which adopted from vitrification of exceedingly chilling sensitive Drosophila. By this technique, Martino et al., (1996) reported that higher developmental capacity of frozen bovine mature oocytes was obtained. Therefore, this study was carried out to examine whether the developmental capacity of bovine immature oocytes frozen ultra-rapidly using EM grids and EFS30 can be obtained.
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